产品介绍

小鼠中耳类器官完全培养基是一款用于扩增和分化小鼠中耳类器官的商品化培养基，能够在气液-界面（ALI）或3D基质胶包裹体系中将小鼠中耳上皮组织来源的干细胞诱导分化形成小鼠中耳类器官。分化好的小鼠中耳类器官包含基底细胞、纤毛细胞、黏液分泌细胞等，因此在结构、细胞类型组成上表现出中耳上皮的所有特征，在中耳发育和疾病的研究中具有良好的应用前景。

产品信息

产品组成	货号	规格	储存条件及周期
Mouse middle Ear Tissue Digestion Solution A	MmECM-100	50 mL	4℃，6个月
Mouse middle Ear Tissue Digestion Solution B (25×)	MmECM-100	1 mL × 2	-20℃，1年
Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium A	MmECM-100	50 mL	4℃，6个月
Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium B (20×)	MmECM-100	1.25 mL × 2	-20℃，1年
Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium C (250×)	MmECM-100	0.2 mL	-20℃，1年
Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium A	MmECM-100	50 mL	4℃，6个月
Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium B (20×)	MmECM-100	1.25 mL × 2	-20℃，1年
Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium C (250×)	MmECM-100	0.2 mL	-20℃，1年

小鼠中耳类器官完全培养基的制备

在无菌条件下制备小鼠中耳组织消化液、小鼠中耳类器官扩增培养基及小鼠中耳类器官分化培养基。以下是准备10 mL小鼠中耳组织消化液、10 mL小鼠中耳类器官扩增培养基及10 mL小鼠中耳类器官分化培养基的示例，如所需量不同，请进行相应用量调整。

（1）小鼠中耳组织消化液

1. 冰上解冻Mouse middle Ear Tissue Digestion Solution B（25×）。

注意：解冻后，建议将Mouse middle Ear Tissue Digestion Solution B（25×）按需分装后保存取用，避免反复冻融。

2. 将400 μL Mouse middle Ear Tissue Digestion Solution B（25×）加至9.6 mL Mouse middle Ear Tissue Digestion Solution A中，充分混合，配制成10 mL小鼠中耳组织消化液。

注意：配制后的完全组织消化液可在2-8℃储存，建议24小时内使用，或-20℃储存1月。

（2）小鼠中耳类器官扩增培养基

1. 冰上解冻Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium B (20×)和Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium C (250×)。

注意：解冻后，建议将Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium B (20×)和Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium C (250×)按需分装后保存取用，避免反复冻融。

2. 将500 μL Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium B (20×), 40μL Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium C (250×)加至9.46 mL Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium A中，充分混合，配制成10 mL小鼠中耳类器官扩增培养基。

注意：配制后的小鼠中耳组织消化液可在2-8℃储存，建议在两周内使用。Mouse middle Ear Organoid expansion Complete Medium A内含有细菌及真菌抗生素。

（3）小鼠中耳类器官分化培养基

1. 冰上解冻Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium B (20×)和Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium C (250×)。

注意：解冻后，建议将Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium B (20×)和Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium C (250×)按需分装后保存取用，避免反复冻融。

2. 将500 μL Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium B (20×), 40 μL Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium C (250×)加至9.46 mL Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium A中，充分混合，配制成10 mL小鼠中耳类器官扩增培养基。

注意：配制后的小鼠中耳组织消化液可在2-8℃储存，建议在两周内使用。Mouse middle Ear Organoid differentiation Complete Medium A内含有细菌及真菌抗生素。

附录1 小鼠中耳上皮培养过程图

图1. 小鼠中耳类器官原代（P0）培养过程示例图。（A）接种第一天可见有细胞贴壁；（B）生长至第天时，可观察到上皮细胞成片生长；（C）继续生长至第5天，基本铺满整个孔底。比例尺：200 μm。

图2. 小鼠中耳类器官3D培养生长、传代与分化图示例图。（A）小鼠中耳类器官3D培养以囊泡状球体居多。比例尺：200 μm。（B）小鼠中耳类器官传代后正常生长，呈泡状和实体混合结构。比例尺：500 μm。（C）小鼠中耳类器官分化后以实体结构为主。比例尺：500 μm。

其他需准备的试剂信息

试剂名称	厂家	货号
类器官专用基质胶	SHRbio	OEM-10
上皮类器官基础培养基	SHRbio	OBM-500
类器官传代消化液	SHRbio	OPD-100
类器官润洗液	SHRbio	OMR-100
红细胞裂解液	-	-
DPBS（不含钙镁离子）	-	-
鼠尾胶原I	Corning	354236