01 类器官模型构建
服务内容
提供正常及肿瘤类器官的代培养、复苏、传代、样本库构建等。临床样本来源包括手术切除样本、穿刺活检样本、胸腹水样本等。此外，还可提供罕见疾病样本来源的类器官模型构建，根据客户需求进行个性化类器官培养。
交付内容
类器官冻存管：P2/3代，3管，每管细胞量不少于5x10^5个。培养报告：明场照片(每代次1张)、HE染色、支原体检测报告、STR鉴定报告。
↑ 类器官模型构建交付内容举例：A. 人肺小细胞癌肿瘤组织来源的肺小细胞癌类器官(原代)明场照片。B. 人肺小细胞癌类器官(传代)明场照片。C. 人肺小细胞癌肿瘤组织HE染色结果。D. 人肺小细胞癌类器官HE染色结果。E. 支原体检测报告。F. STR鉴定报告。比例尺：100 μm。
02 类器官形态学鉴定
服务内容
提供正常及肿瘤类器官的形态学鉴定结果，包括HE染色、免疫组化染色、免疫荧光染色、流式细胞分析等结果。其中，免疫荧光染色可进行单标、双标或多色染色；流式细胞分析可进行单标或双标分析。
03 类器官活性检测
类器官实时活性检测
提供类器官实时活性检测服务，包括SYTOX Green染色法、类器官面积/数量检测、活死细胞染色法。SYTOX Green死细胞核酸染料是一种可轻易穿过受损细胞质膜而不能透过活细胞质膜的绿色核酸染料，其与核酸结合之后荧光强度会得到超过500倍的显著增强。可以利用带有450-490 nm激发光源的激发器激发染料，从而获得荧光图像进行进一步分析。
↑ 类器官SYTOXGreen染色：A. 人食管癌肿瘤组织来源的食管癌类器官明场图。B. 食管癌类器官的SYTOX Green染色。C. A与B重叠后的结果，可观察到食管癌类器官中发生死亡的细胞情况。比例尺：100 μm。
活死细胞染色，即Calcein-AM/PI染色，是一种非常便捷的基于Calcein-AM(钙黄绿素)和PI(碘化丙啶)双荧光染色法检测细胞活性的染色方法。Calcein-AM可以对活细胞进行荧光染色，其在Calcein的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团，很容易穿透细胞膜。Calcein-AM进入细胞后可被活细胞中酯酶水解生成可发出强绿色荧光的Calcein。PI是核酸红色荧光染料，其不能穿透活细胞的细胞膜，只能进入死细胞。因此Calcein-AM与PI联合使用可对活细胞和死细胞同时进行双重荧光染色。
↑ 类器官活死细胞染色：A. 人食管癌类器官明场图。B. 人食管癌类器官Calcein-AM(钙黄绿素)染色图。C. 人食管癌类器官PI(碘化丙啶)染色图。D. ABC组合图。比例尺：200 μm。
终点法活性检测
提供类器官终点法活性检测服务，包括CCK8法、MTT法、CTG发光法。CCK8法试剂中含有水溶性的四唑盐WST-8，可被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒。生成的甲瓒数量与活细胞的数量成正比，可使用比色法进行定量分析。因此，CCK8法可用于进行细胞活性分析。MTT法检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。因此，MTT法可以简单、快捷、准确地测定类器官中细胞的增殖反应。CTG发光法基千高灵敏度生物发光检测技术，通过对细胞内三磷酸腺苷(ATP)进行定量检测明确类器官培养物中活细胞数目及细胞活力。CTG特有均质检测法，即“加样-混样-检测”，使用时只需将试剂等体积添加至培养物中即可进行检测，比MTT的处理速度快近20倍。
04 肿瘤类器官药敏检测
服务内容
通过对患者肿瘤组织的体外3D培养，建立稳定的个体化肿瘤类器官，再从药品库中选择想要进行药敏检测的药物(包括化疗药、靶向药、免疫治疗药物、联合用药方案)进行分析，从而获得肿瘤类器官的药物敏感性结果。药敏检测的评价方式主要通过CTG发光法明确类器官培养物中活细胞数目及细胞活力。
05 类器官基因编辑
服务内容
使用CRISPR基因编辑技术或慢病毒表达载体在类器官内完成特定基因的敲入或敲除。CRISPR基因编辑技术将crRNA与Cas9蛋白形成复合物，在SgRNA指引下，crRNA/Cas9复合物可靶向目的DNA区域定向切割DNA，从而达到基因编辑的目的。利用慢病毒(Lentivirus)载体实现外源基因递送或基因表达干扰。类器官培养扩增后分散成单个细胞，将这些单个细胞与慢病毒颗粒混合后，接种在基质胶中孵育。随后加入筛选压力继续培养(例如嘌呤霉素)，经过1-3周的筛选，最终得到稳定的基因修饰类器官。
↑ 类器官慢病毒转染技术：A. 类器官慢病毒转染技术示意图。B. 人结肠类器官转染带GFP慢病毒后的荧光图及明场组合图。比例尺：200 μm。
06 类器官共培养模型
类器官免疫共建主要包括与肿瘤浸润淋巴细胞、T细胞、巨噬细胞、成纤维细胞的共培养模型。通过患者来源类器官和免疫细胞在体外重建免疫微环境，以测试各种免疫相关疗法的有效性，包括免疫检査点抑制剂(PD-1/L1抑制剂)、肿瘤浸润淋巴细胞疗法和嵌合抗原抗体T细胞(CAR-T)疗法等。该体系可以保留患者的异质性，并保留关键的肿瘤相关抗原，为相关药物的开发或临床标志物的筛选提供更强的免疫共培养平台。
与肿瘤浸润淋巴细胞共培养
将患者自体的血液、胸腹水或肿瘤组织通过差速离心等方法分离免疫细胞，培养扩增后，以一定的效靶比加入患者来源的肿瘤类器官培养体系中进行免疫共培养。可检测免疫细胞对肿瘤的杀伤能力以及肿瘤微环境中免疫细胞的浸润情况。
↑ 类器官与肿瘤浸润淋巴细胞共培养：A. 将患者的肿瘤浸润淋巴细胞与胃癌类器官混合培养后，使用流式细胞术分选出CD3阳性淋巴细胞(蓝色框)及EDCAM阳性肿瘤细胞(紫色框)，再进行流式细胞活性分析(B)或PI染色(C)，以明确免疫细胞对类器官的杀伤作用。
与T细胞共培养
患者来源的肿瘤类器官与CAR-T细胞共培养系统可用于评价CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。
与巨噬细胞共培养
小鼠肺中有两大类巨噬细胞，肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage，AM)和间质巨噬细胞(interstitialmacrophage，IM)AM存在于肺泡中，而IM存在于肺上皮和一些毛细血管之间，可与其他免疫细胞相互作用。巨噬细胞参与炎症免疫反应，在急性肺损伤小鼠模型中，肺部巨噬细胞的数量显著升高。分离小鼠IM后与小鼠肺类器官共培养可用于研究IM对急性肺损伤发展的作用机制。此外，这一共培养体系还能进一步促进与巨细胞相关的研究进展。
与成纤维细胞共培养
在细胞外基质成分中，癌症相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast，CAF)是与癌细胞相互作用的关键功能调节因子。CAF是一类异质性细胞群，具有多种功能，并与免疫疗法效果不佳有关。TGF-B刺激、炎症细胞因子和受体酪氨酸激酶配体共同促进了CAF的形成。癌细胞周围的正常成纤维细胞(normal fibroblast，NF)是CAF的祖细胞，癌前病变和早期癌症中存在大量的NE，表明NF在肿瘤发生的早期阶段可能发挥重要作用。普通肿瘤类器官模型的局限性在于培养体系中缺乏肿瘤微环境成分，包括NE及CAF。因此，通过将肿瘤类器官与成纤维细胞的共培养，能够开发出一种简单的模型来阐明肿瘤与细胞外基质成分之间的相互关系。
07 基于肿瘤类器官的化合物筛选
新药开发是一个复杂的过程，从先导化合物的发现到临床，通常需要十年甚至更久。传统的化合物筛选主要依赖于2D培养的细胞模型，但2D细胞模型在进行药效评估方面存在一定的局限性。患者来源的肿瘤类器官作为研究肿瘤的新型工具，在保留肿瘤原有的生物学特征之外，还能够稳定的传代，因此在抗肿瘤药物的化合物筛选与开发中存在得天独厚的优势。
08 肿瘤类器官移植瘤小鼠模型
类器官移植瘤小鼠模型(Patient-derived organoid-based xenograft，PDOX)是指通过把类器官移植到免疫缺陷鼠而建立的人源异种移植模型。PDOX模型在保留了类器官优点的同时，可进行体内药理测试。目前，PDOX广泛应用于肿瘤遗传学研究及新药开发研究，可提供配套的体外数据和体内数据。
09 iPSC衍生类器官构建
诱导多能干细胞(iPSC)是一种将成熟体细胞重编程为具有类似胚胎干细胞特性的多能干细胞。这些细胞具有分化成多种细胞类型的能力，在再生医学和疾病模型研究中具有巨大潜力。iPSC源性类器官由iPSC分化而来，能够在体外模拟特定器官或组织的结构和功能。
iPSC衍生心脏类器官
心脏类器官是通过将IPSC分化为心肌细胞、心脏成纤维细胞和心脏内皮细胞等心脏织织特有的细胞类型，然后在体外三维培养条件下形成的具有一定组织结构和功能的微型器官。
↑ iPSC衍生心脏类器官的培养及鉴定：A. 诱导中胚层分化(D0至D4)。B. 诱导心脏类器官分化，出现自主搏动(D10至D12)。C. 心脏类器官成熟(D12至D35)。比例尺：50 μm。D. 心脏类器官免疫荧光染色结果显示成纤维细胞标志物(Vimentin，绿色)以及细胞核标志物(DAPI，蓝色)。E. 心脏类器官免疫荧光染色显示心肌细胞标志物(CTnT，绿色)、血管平滑肌细胞标志物(G-SMA，红色)以及细胞核标志物(DAPI，蓝色)。比例尺：100 μm。
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