产品介绍

HiPSC内耳类器官试剂盒是一款无血清培养系统，通过精确调控HiPSC分化路径，可在60天左右将人诱导多能干细胞（HiPSC）高效诱导分化为具有3D结构的耳囊泡样类器官，形成毛细胞、支持细胞及与之形成突触连接的感觉神经元的复合感觉上皮结构。本产品为内耳发育机制研究、听力相关疾病建模、药物筛选及再生疗法开发提供了高度仿生且可重复的体外实验平台。

产品信息

产品组成	货号	规格	储存条件及周期
Embryoid Body Induction formation Basic Medium	HiIEO-K200	8 mL	4℃，6个月
Supplement H (5×)	HiIEO-K200	2 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium A	HiIEO-K200	10 mL	4℃，6个月
Supplement A (20×)	HiIEO-K200	0.5 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium B	HiIEO-K200	10 mL	4℃，6个月
Supplement B (20×)	HiIEO-K200	0.5 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium C	HiIEO-K200	5 mL	4℃，6个月
Supplement C (20×)	HiIEO-K200	0.25 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium D	HiIEO-K200	5 mL	4℃，6个月
Supplement D (20×)	HiIEO-K200	0.25 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium E	HiIEO-K200	20 mL	4℃，6个月
Supplement E (20×)	HiIEO-K200	1 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium F	HiIEO-K200	140 mL	4℃，6个月
Supplement F (20×)	HiIEO-K200	7 mL	-20℃，1年
Supplement G (200×)	HiIEO-K200	0.8 mL	4℃，6个月

HiPSC内耳类器官完全培养基的制备

在无菌条件下制备HiPSC内耳类器官完全培养基。以下是准备拟胚体诱导培养基，内耳类器官诱导培养基A，内耳类器官诱导培养基B，内耳类器官诱导培养基C，内耳类器官诱导培养基D, 内耳类器官分化培养基E, 内耳类器官分化培养基F的示例，如所需量不同，请进行相应用量调整。

1、 冰上解冻Supplement H（5×），Supplement A（20×），Supplement B（20×），Supplement C（20×），Supplement D（20×） ，Supplement E（20×），Supplement F（20×），Supplement G（200×）。

注意：解冻后，建议将Supplement H（5×），Supplement A（20×），Supplement B（20×），Supplement C（20×），Supplement D（20×） ，Supplement E（20×），Supplement F（20×），Supplement G（200×）按需分装后保存取用，避免反复冻融。

2、拟胚体诱导培养基：将200 μL Supplement H加至800 μL Embryoid Body Induction formation Basic Medium中，充分混合，配制成1 mL拟胚体诱导培养基。

3、内耳类器官诱导培养基A：将250 μL Supplement A加至4.75 mL Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium A中，充分混合，配制成5 mL内耳类器官诱导培养基A。

4、内耳类器官诱导培养基B：将250 μL Supplement B加至4.75 mL Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium B中，充分混合，配制成5 mL内耳类器官诱导培养基B。

5、内耳类器官诱导培养基C：将250 μL Supplement C加至4.75 mL Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium C中，充分混合，配制成5 mL内耳类器官诱导培养基C。

6、内耳类器官诱导培养基D：将250 μL Supplement D加至4.75 mL Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium D中，充分混合，配制成5 mL内耳类器官诱导培养基D。

7、内耳类器官分化培养基E：将250 μL Supplement E，25 μL Supplement G加至4.725 mL Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium E中，充分混合，配制成5 mL内耳类器官分化培养基E。

8、内耳类器官分化培养基F：将250 μL Supplement F，25 μL Supplement G加至4.725 mL Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium F中，充分混合，配制成5 mL内耳类器官分化培养基F。

注意：配制后的培养基可在2-8℃储存，建议现配现用，配置好的培养基在尽量3天内用完。Embryoid Body Induction formation Basic Medium，Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium A，Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium B，Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium C，Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium D, Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium E, Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium F内含有细菌及真菌抗生素。

附录1 HiPSC内耳类器官构建流程

图1. hiPSC内耳类器官构建流程图，比例尺：200 μm。

附录2 HiPSC内耳类器官鉴定图

图2. hiPSC内耳类器官免疫荧光鉴定图，比例尺：100 μm。其中E-CAD为耳囊阶段标记物，ANXA4、MYO7A为毛细胞标记物，MAP2、PROX1为神经元标记物。第28天，类器官形成典型耳囊结构，并出现耳前体细胞群；第52天，进一步分化出毛细胞及与之突触连接的感觉神经元；第60天后，内耳类器官发育形成成熟的毛细胞、听觉神经元等。

其他需准备的试剂信息

试剂名称	厂家	货号
hiPSC完全培养基	STEM CELL	85850
hiPSC培养专用基质胶	CORNING	354277
hiPSC细胞解离液	Gibco	12605010
Matrigel基质胶	CORNING	356231
DPBS	-	-