产品介绍

Plurioid^TM hPSC内耳类器官试剂盒是一款无血清培养系统，通过精确调控hPSC分化路径，可在60天左右将人多能干细胞（hPSC）高效诱导分化为具有3D结构的耳囊泡样类器官，形成毛细胞、支持细胞及与之形成突触连接的感觉神经元的复合感觉上皮结构。本产品为内耳发育机制研究、听力相关疾病建模、药物筛选及再生疗法开发提供了高度仿生且可重复的体外实验平台。

本试剂盒规格为100 mL，预计可生成30个内耳类器官，需要操作人员具有hPSC培养经验，并对类器官具有一定了解。

产品信息

产品组成	货号	规格	储存条件及周期
Embryoid Body Induction formation Basic Medium	HiIEO-K100	8 mL	4℃，6个月
Supplement A (5×)	HiIEO-K100	2 mL	-20℃，1年
Supplement B (100×)	HiIEO-K100	0.05 mL	-20℃，1年
Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium	HiIEO-K100	25 mL	4℃，6个月
Supplement C (20×)	HiIEO-K100	0.5 mL	-20℃，1年
Supplement D (20×)	HiIEO-K100	0.5 mL	-20℃，1年
Supplement E (20×)	HiIEO-K100	0.05 mL	-20℃，1年
Supplement F (20×)	HiIEO-K100	0.05 mL	-20℃，1年
Human iPSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium B	HiIEO-K100	65 mL	4℃，6个月
Supplement G (20×)	HiIEO-K100	1.7 mL×2	-20℃，1年
Supplement H (500×)	HiIEO-K100	0.1 mL	-20℃，1年

hPSC内耳类器官完全培养基的制备

在无菌条件下制备hPSC内耳类器官完全培养基。以下是准备拟胚体诱导培养基，内耳类器官诱导培养基A，内耳类器官诱导培养基B，内耳类器官诱导培养基C，内耳类器官诱导培养基D, 内耳类器官分化培养基E, 内耳类器官分化培养基F的示例，如所需量不同，请进行相应用量调整。

1、 冰上解冻Supplement A（5×） , Supplement B(100×)，Supplement C（20×），Supplement D（20×），Supplement E（20×），Supplement F（20×） ，Supplement G （20×） ，Supplement H（20×），Supplement I(500×)。

注意：解冻后，建议将Supplement A（5×） , Supplement B（100×）,Supplement C（20×），Supplement D（20×），Supplement E（20×），Supplement F（20×） ，Supplement G （20×） ，Supplement H（20×），Supplement I(500×)按需分装后保存取用，避免反复冻融。对于所有微量试剂组分建议解冻后瞬时离心5秒钟（500-2000rpm），再开盖使用，以避免损失。

2、拟胚体诱导培养基a：将200μL Supplement A（5×），10μL Supplement B(100×）加至790μLEmbryoid Body Induction formation Basic Medium中，充分混合，配制成1mL拟胚体诱导培养基a。

3、拟胚体诱导培养基b：将200μL Supplement A（5×），加至 800μL Embryoid Body Induction formation Basic Medium中，充分混合，配制成1mL拟胚体诱导培养基b。

4、内耳类器官诱导培养基c：将250μL Supplement C（20×），加至4.75mL Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium 中，充分混合，配制成5mL内耳类器官诱导培养基c。

5、内耳类器官诱导培养基d：将250μL Supplement D（20×），加至4.75mL Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium 中，充分混合，配制成5mL内耳类器官诱导培养基d。

6、内耳类器官诱导培养基e：将50μL Supplement E（20×），加至0.95mL Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium 中，充分混合，配制成1mL内耳类器官诱导培养基e。

7、内耳类器官诱导培养基f：将50μL Supplement F（20×），加至0.95mL Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium 中，充分混合，配制成1mL内耳类器官诱导培养基f。

8、内耳类器官分化培养基g：将250μL Supplement G（20×），加至4.75mL Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium 中，充分混合，配制成5mL内耳类器官分化培养基g。

9、内耳类器官分化培养基h：将250μL Supplement H（20×），10μL Supplement I（100×）加至4.740mL Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium 中，充分混合，配制成5mL内耳类器官分化培养基h。

注意：配制后的培养基可在2-8°C储存，建议现配现用，配置好的培养基在尽量3天内用完。Embryoid Body Induction formation Basic Medium，Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Induction Basic Medium, Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Differentiation Basic Medium 内含有细菌及真菌抗生素。

注意事项

1. 产品的分装、使用等操作需在无菌环境下进行。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅供科研使用，禁止用于人体。

论文发表规范引用参考

Human inner ear organoids were prepared from hPSCs with Plurioid^TM Human PSC-Derived Inner Ear Organoid Kit（HiIEO-K100，SHR Biotechnology, Wuxi, China) according to manufacturer instructions.

附录1 hPSC内耳类器官构建流程

图1 hPSC内耳类器官构建流程图。比例尺：200μm。

附录2 hPSC内耳类器官鉴定图

图2 hPSC内耳类器官免疫荧光鉴定图。其中E-CAD为耳囊阶段标记物，ANXA4、MYO7A为毛细胞标记物，MAP2、PROX1为神经元标记物。第28天，类器官形成典型耳囊结构，并出现耳前体细胞群；第52天，进一步分化出毛细胞及与之突触连接的感觉神经元；第60天后，内耳类器官发育形成成熟的毛细胞、听觉神经元等。比例尺：100μm。

其他需准备的试剂信息

试剂名称	厂家	货号
hPSC完全培养基	SHR Biotechnology	HPCM-100
hPSC传代消化液	SHR Biotechnology	HPPD-100
类器官专用基质胶	SHR Biotechnology	OEM-10
hPSC培养专用基质胶	CORNING	354277
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