产品介绍

Plurioid^TM hPSC血管类器官试剂盒是一款基于人多能干细胞的专用培养系统，通过精准调控血管发育相关信号通路，可在体外高效构建功能完整的三维血管类器官。试剂盒采用优化无血清配方，仅需23天即可将hPSC定向分化，形成包含CD31+内皮细胞、α-SMA+平滑肌细胞、PDGFRβ+周细胞等多种关键血管细胞的类器官结构，并自发组装出具备生理活性的管腔组织。其细胞构成、组织结构及屏障功能均高度模拟天然血管，可为血管发育机制研究、血管相关疾病模型构建、抗血管药物筛选与药物安全性评价，提供稳定可靠、高仿真的体外三维研究模型。

本试剂盒规格为100 mL，预计可生成60个成熟血管类器官，并维持培养10天。该试剂盒使用需要操作人员具有hPSC培养经验，并对类器官具有一定了解。

产品信息

产品组成	货号	规格	储存条件及周期
Embryoid Body Induction formation Medium	HiBVO-K100	8 mL	4℃，6个月
Supplement A (5×)	HiBVO-K100	1 mL×2	-20℃，1年
Mesoderm Induction Medium	HiBVO-K100	10 mL	4℃，6个月
Supplement B (25×)	HiBVO-K100	0.4 mL	-20℃，1年
Vascular Lineage Induction Medium	HiBVO-K100	10 mL	4℃，6个月
Supplement C (25×)	HiBVO-K100	0.4 mL	-20℃，1年
Vascular Differentiation Medium	HiBVO-K100	20 mL	4℃，6个月
Supplement D (25×)	HiBVO-K100	0.8 mL	-20℃，1年
Vascular Angiogenesis Matrix Preparation Medium	HiBVO-K100	1 mL×2	4℃，6个月
Vascular Angiogenesis Matrix I	HiBVO-K100	0.75 mL×2	4℃，6个月
Vascular Angiogenesis Matrix II	HiBVO-K100	1 mL	-20℃，6个月
Blood Vessel Organoid Maturity Medium	HiBVO-K100	50 mL	4℃，6个月
Supplement E (25×)	HiBVO-K100	1 mL×2	-20℃，1年

hPSC血管类器官完全培养基的制备

在无菌条件下制备hPSC血管类器官完全培养基。以下是准备将PSC诱导为血管类器官的拟胚体形成完全培养基、中胚层诱导完全培养基，血管谱系诱导完全培养基，血管分化完全培养基，血管类器官成熟完全培养基以及血管新生基质的制备示例，如所需量不同，请根据比例进行用量调整。

1、 冰上解冻Supplement A (5×)，Supplement B (25×)，Supplement C (25×)，Supplement D (25×)，Supplement E (25×)。

注意：解冻后，建议将Supplement A (5×)，Supplement B (25×)，Supplement C (25×)，Supplement D (25×)，Supplement E (25×)按需分装后保存取用，避免反复冻融。对于微量试剂组分建议瞬时离心5秒钟（500-2000 rpm)后，再开盖使用，以避免损失。

2、 将400 μL Supplement A (5×)加至1.6 mL Embryoid Body Induction formation Medium中，充分混合，配制成2 mL 拟胚体形成完全培养基。

3、 将80 μL Supplement B (25×)加至1.92 mL Mesoderm Induction Medium中，充分混合，配制成2mL 中胚层诱导完全培养基。

4、 将160 μL Supplement C (25×)加至3.84 mL Vascular Lineage Induction Medium中，充分混合，配制成4mL血管谱系诱导完全培养基。

5、 将80 μL Supplement D (25×)加至1.92 mL Vascular Differentiation Medium中，充分混合，配制成2mL 血管分化完全培养基。

6、 将400 μL Supplement E (25×)加至9.6 mL Blood Vessel Organoid Maturity Medium中，充分混合，配制成10 mL 血管类器官成熟完全培养基。

注意：配制好的培养基可在2-8°C储存不超过3天，建议现配现用。Embryoid Body Induction formation Medium，Mesoderm Induction Medium，Vascular Lineage Induction Medium，Vascular Differentiation Medium，以及Blood Vessel Organoid Maturity Medium内均含有细菌及真菌抗生素。

7、 血管新生基质配制，以4mL用量为例：

（1）配制pH为7.4的血管新生专用胶混合溶液：将1.5 mL Vascular Angiogenesis Matrix I与1.5 mL Vascular Angiogenesis Matrix Preparation Medium混合，制备成3mL 血管新生专用胶混合溶液，快速用pH指示条测量混合溶液的pH值，pH值应为~7.4 。如不符合pH值要求，使用NAOH(1M) 和HCI（1M）进行调节。

（2）配制血管新生基质：将3mL血管新生专用胶混合溶液与1mL Vascular Angiogenesis Matrix II充分混匀，配制成血管新生基质。

注意：此操作均需在冰上操作。

注意事项

1、产品的分装、使用等操作需在无菌环境下进行。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3、本产品仅供科研使用，禁止用于人体。

论文发表规范引用参考

Human blood vessel organoids were prepared from hPSCs with Human PSC-Derived Blood Vessel Organoid Kit (HiBVO-K100，Plurioid^TM SHR Biotechnology, Wuxi, China) according to manufacturer instructions.

附录1 hPSC血管类器官构建流程图

图1 hPSC血管类器官构建流程图，比例尺：100 μm。

附录2 hPSC血管类器官鉴定图

图2 hPSC血管类器官免疫荧光染色鉴定。分别对成熟血管类器官进行免疫荧光染色。其中，CoI IV用于标记血管基底膜、CD31用于标记血管内皮细胞，α-SMA用于标记血管平滑肌细胞。比例尺：20 μm(上)或50 μm(下)。

图3 透射电镜观察hPSC血管类器官。透射电镜观察hPSC血管类器官中的管腔结构，可见血管腔外周环绕着内皮细胞，并且出现紧密连接，外周存在结合的周细胞和平滑肌细胞。EC-内皮细胞；PER-周细胞；SMC-平滑肌细胞；Lumen-管腔；BM-基底膜；TJ-紧密连接。

其他需准备的试剂信息

试剂名称	厂家	货号
hPSC完全培养基	SHR Biotechnology	HPCM-100
hPSC传代消化液	SHR Biotechnology	HPPD-100
hPSC培养专用基质胶	CORNING	354277
NAOH	-	-
HCL	-	-
DPBS	-	-