产品介绍

HiPSC血管类器官试剂盒是一款基于人多能干细胞的专业培养系统，通过精确调控血管发育信号通路，可在体外高效构建具有完整功能的3D血管类器官。该试剂盒采用优化的无血清配方，能在16-23天内将hiPSC诱导分化为包含CD31+内皮细胞、α-SMA+平滑肌细胞、PDGFRβ+周细胞等多种血管组成细胞的类器官，并形成具有生理活性的管腔结构，其组织结构、细胞组成和屏障功能与天然血管高度相似，为血管发育研究、血管相关疾病建模、抗血管药物筛选及药物安全性评估提供了高度仿真的体外研究模型。

产品信息

产品组成	货号	规格	储存条件及周期
Embryoid Body Induction formation Medium	HiBVO-K100	20 mL	4℃，6个月
Supplement A (5×)	HiBVO-K100	5 mL	-20℃，1年
Mesoderm Induction Medium	HiBVO-K100	10 mL	4℃，6个月
Supplement B (25×)	HiBVO-K100	0.4 mL	-20℃，1年
Vascular Lineage Induction Medium	HiBVO-K100	10 mL	4℃，6个月
Supplement C (25×)	HiBVO-K100	0.4 mL	-20℃，1年
Vascular Differentiation Medium	HiBVO-K100	40 mL	4℃，6个月
Supplement D (25×)	HiBVO-K100	1.6 mL	-20℃，1年
Vascular Angiogenesis Matrix Preparation Medium	HiBVO-K100	10 mL	4℃，6个月
Vascular Angiogenesis Matrix I	HiBVO-K100	3.75 mL	4℃，6个月
Vascular Angiogenesis Matrix II	HiBVO-K100	2.5 mL	-20℃，6个月
Blood Vessel Organoid Maturity Medium	HiBVO-K100	20 mL	4℃，6个月
Supplement E (25×)	HiBVO-K100	0.8 mL	-20℃，1年

HiPSC血管类器官完全培养基的制备

在无菌条件下制备HiPSC血管类器官完全培养基。以下是准备将iPSC诱导为血管类器官的拟胚体形成完全培养基、中胚层诱导完全培养基，血管谱系诱导完全培养基，血管分化完全培养基，血管类器官成熟完全培养基以及血管新生基质的制备示例，如所需量不同，请根据比例进行用量调整。

1、 冰上解冻Supplement A (5×)，Supplement B (25×)，Supplement C (25×)，Supplement D (25×)，Supplement E (25×)。

注意：解冻后，建议将Supplement A (5×)，Supplement B (25×)，Supplement C (25×)，Supplement D (25×)，Supplement E (25×)按需分装后保存取用，避免反复冻融。

2、 将2 mL Supplement A (5×)加至8 mL Embryoid Body Induction formation Medium中，充分混合，配制成10 mL拟胚体形成完全培养基。

3、 将40 μL Supplement B (25×)加至960 μL Mesoderm Induction Medium中，充分混合，配制成1 mL 中胚层诱导完全培养基。

4、 将40 μL Supplement C (25×)加至960 μL Vascular Lineage Induction Medium中，充分混合，配制成1 mL血管谱系诱导完全培养基。

5、 将40 μL Supplement D (25×)加至960 μL Vascular Differentiation Medium中，充分混合，配制成1 mL 血管分化完全培养基。

6、 将400 μL Supplement D (25×)加至9.6 mL Blood Vessel Organoid Maturity Medium中，充分混合，配制成10 mL 血管类器官成熟完全培养基。

注意：配制后的培养基可在2-8℃储存，配置好的培养基在尽量三天内用完，建议现配现用。Embryoid Body Induction formation Medium，Mesoderm Induction Medium，Vascular Lineage Induction Medium，Vascular Differentiation Medium以及Blood Vessel Organoid Maturity Medium内均含有细菌及真菌抗生素。

7、 血管新生基质配制，以4 mL用量为例：

（1）配制pH为7.4的血管新生专用胶混合溶液：将1.5 mL Vascular Angiogenesis Matrix I与1.5 mL Vascular Angiogenesis Matrix Preparation Medium混合，制备成3 mL血管新生专用胶混合溶液，快速用pH指示条测量混合溶液的pH值，pH值应为~7.4。如不符合pH值要求，使用NAOH（1M）和HCI（1M）进行调节。

（2）配制血管新生基质：将3 ml血管新生专用胶混合溶液与1 mL Vascular Angiogenesis Matrix II充分混匀，配制成血管新生基质。注意：此操作均需在冰上操作。

附录1 HiPSC血管类器官构建流程图

图1. hiPSC血管类器官构建流程图，比例尺：200 μm。

附录2 HiPSC血管类器官鉴定图

图2. hiPSC血管类器官免疫荧光染色鉴定。分别对成熟血管类器官进行免疫荧光染色。其中，α-SMA用于标记血管平滑肌细胞、CD31用于标记血管内皮细胞，CoI IV用于标记血管基底膜。比例尺：50 μm（左）或20 μm（右）。

其他需准备的试剂信息

试剂名称	厂家	货号
hiPSC完全培养基	STEM CELL	85850
hiPSC培养专用基质胶	CORNING	354277
hiPSC细胞解离液	Gibco	12605010
NAOH	-	-
HCL	-	-
DPBS	-	-